Генитальный герпес — частая причина бесплодия, невынашиваемости беременности, преждевременных родов, неонатальных инфекций. Широкое распространение инфекции обусловлено возможностью ее активации под воздействием различных экзогенных и эндогенных факторов, снижающих сопротивляемость организма. Клинические проявления герпетических заболеваний многообразны и включают кератиты, гингивостоматиты, энцефалиты, генитальные инфекции, а также тяжелые диссеминированные заболевания у иммунодефицитных больных.

Подготовка материала для исследования
Забор биоматериала производится из очагов поражения. На наличие антигена ВПГ исследуют везикулярную жидкость, соскобы с основания везикул, слезную жидкость, спинномозговую жидкость, слюну, зараженные культуры клеток при необходимости идентификации выделенных инсолятов вируса.
У женщин забор материала производят со слизистой уретры, шейки матки и заднего свода влагалища. У мужчин - со слизистой уретры. Для получения материала со слизистой используется одноразовый зонд, имеющий ватный тампон с повышенной ад¬сорбцией, или пластиковый зонд с синтетическим ворсом.
Материал собирают вращательным движением зонда. Непосредственно после взятия материала готовят мазок-отпечаток, касаясь поверхности лунки предметного стекла.

Приготовление материала для исследования
Соскоб клеток из мест локализации инфекции наносят на обезжиренные предметные стекла.
Высушивают при комнатной температуре.
Фиксируют 96%-ным этанолом в течение 5 мин. или наносят на мазок 2-3 капли ацетона до полного его испарения.
После фиксации проводят исследование препаратов, как описано в разделе «Постановка РнИФ».
Примечание. При необходимости фиксированные препараты хранить при темпе¬ратуре -20°С в течение 1 месяца.

Постановка РнИФ
Вскрывают флакон препарата «ГерпесСлайд» с антителами герпес-вирусными (флакон №1) и флакон с ФИТЦ - меченными антителами (флакон №2). Добавляют по 1 мл дистиллированной воды в каждый флакон и растворяют содержимое в течение 1-2 мин. при комнатной температуре, слегка встряхивая флаконы. Растворенные реа¬генты можно хранить в темноте при температуре +2...+8°С в течение 10 суток. Допускается однократное замораживание растворенных реагентов.

1.На мазок микропипеткой наносят 30 мкл раствора из флакона №1. Стекло помеща¬ют во влажную камеру и выдерживают при комнатной температуре или в термоста¬те при 37 °С в течение 15 мин.

2.Стекло промывают в проточной водопроводной воде 2 мин., ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.

3.На мазок микропипеткой наносят 30 мкл раствора из флакона №2. Стекло помеща¬ют во влажную камеру и выдерживают при комнатной температуре или в термоста¬те при 37 °С в течение 15 мин.

4.Стекло промывают, как описано в п.2

5.На высушенный мазок наносят каплю монтирующей жидкости, накрывают покровным стеклом и микроскопируют в люминесцентном микроскопе или с использованием люминесцентной насадки к обычному оптическому микроскопу.

Рекомендуется использовать масляную иммерсию с объективом МИ 90* и окуляра¬ми 4-7* или водно-иммерсионную систему с объективами ВИ 60-70* и окулярами 5-10*. Используют микроскоп с фильтрами, обеспечивающими возбуждающий свет с длиной волны не более 490 нм и эмиссию с длиной волны 520 нм.
Порядок расположения фильтров в микроскопе (от лампы):
1.БС-8-3 2.СЗС-24-4 3.ФС-1-4

Учет результатов
При оценке результатов обращают внимание на характер и количество антигенoсодержащих клеток, локализацию специфического ярко-зеленого свечения и его интенсивность. Для вируса герпеса характерно многообразие в характере свечения: от очагов в виде «глыбок» в ядрах и свечения в околоядерной области цитоплазмы до диффузного свечения всей клетки. Возможно обнаружение многоядерных "гигантских" клеток.
Неспецифическая бактериальная микрофлора окрашивается в оранжевый цвет; клетки эпителия, лейкоциты и сперматозоиды - в оранжевый и красно-бурый цвет. Допускается неспецифическое диффузное слабо-зеленое свечение цитоплазмы эпителиальных клеток, слизи и посторонней микрофлоры.
Результат считается положительным при наличии не менее 3 морфологически неизмененных клеток эпителия с интенсивным ярко-зеленым специфическим свечением типичной локализации.
Результат считается отрицательным, если в мазке отсутствует специфическое свечение при обязательном наличии не менее 10 клеточных элементов.
При оценке результатов обращать внимание на локализацию окраски. Если окраска локализована вне или над клеткой, такая окраска оценивается как артефакт.
Срок годности набора -1 год с даты изготовления.