ВагиСлайд™
Инструкция по применению антител диагностических ВагиСлайд™ для выявления ан¬тигенов Gardnerella vaginalis методом непрямой иммунофлюоресценции (РнИФ), сухих

Gardnerella vaginalis — полиморфные палочки, не образующие капсул и спор, неподвижные анаэробные или облигатно-анаэробные штаммы.
При поражении влагалища отмечается снижение количества грамположительных лактобацилл и перераспределение бактериальной флоры за счет появления большого количества мелких грамотрицательных бактерий, адгезированных на поверхности эпителиальных клеток, т.н. «ключевых клеток»; т.к. ключом к установлению диагноза является обнаружение в мазках клеток, обильно усыпанных коккобактериями-гарднереллами.

Принцип метода
Метод основан на взаимодействии антител к поверхностным антигенам Gardnerella vaginalis и антивидовых антител, меченных флюоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ).

Подготовка материала для исследования
Забор материала производят со слизистой влагалища и уретры с использованием одноразового зонда, имеющего ватный тампон с повышенной адсорбцией, или пласти¬кового зонда с синтетическим ворсом.
Материал собирают вращательным движением зонда. Непосредственно после взятия материала готовят мазок-отпечаток, касаясь поверхности лунки предметного стекла. Предметное стекло заранее маркируют, указывая Ф.И.О. больного и дату взятия пробы.
Приготовленный мазок высушивают на воздухе, фиксируют 96%-ным этанолом в течение 5 мин. или наносят на мазок 2-3 капли ацетона до полного его испарения. Стекло с фиксированным мазком может храниться при температуре +2-8 °С в течение 10 суток.

Постановка РнИФ
Вскройте флаконы №1 и №2 препарата «ВагиСлайд». Добавьте по 1 мл дистиллированной воды в каждый флакон и растворите содержимое флаконов при комнатной температуре, слегка встряхивая флаконы. Растворенные реагенты можно хранить в темноте при температуре +2...+8° С в течение 10 суток. Допускается однократное их замораживание.
1.Нанесите 30 мкл раствора из флакона №1 на зафиксированный мазок и помести¬те стекло во влажную камеру.

2.Инкубируйте в горизонтальном положении при комнатной температуре в течение 20-25 минут или в термостате при 37° С в течение 15 минут.

3.Промойте стекло в проточной водопроводной воде в течение 2 минут, ополосните дистиллированной водой. Высушите стекло на воздухе.

4.Нанесите 30 мкл раствора из флакона № 2 на высушенный мазок и положите стекло во влажную камеру.

5.Инкубируйте, как описано в п. 2.

6.Промойте и высушите стекло, как описано в п. 3.

7.Нанесите на мазок каплю монтирующей жидкости и накройте покровным стеклом.

Исследуйте с помощью люминесцентного микроскопа или насадки к обычном микроскопу. Рекомендуется использовать масляную иммерсию с объективом МИ 90* и окулярами 4-5* или водно-иммерсионную систему с объективами ВИ 60-70* и окулярами 5-7*.
Используйте микроскоп с фильтрами, обеспечивающими возбуждающий свет с длиной волны не более 490 нм и эмиссию с длиной волны 520 нм.
Порядок расположения фильтров в микроскопе (от лампы):
1. БС-8-3 2. СЗС-24-4 3. ФС-1-2 или ФС-1-4

Учет результатов
Гарднереллы выявляются в виде кокко-палочек, имеющих ярко-зеленое свечение. Гарднереллы располагаются на поверхности клеток («ключевые клетки»), а также свободно.
Неспецифическая бактериальная микрофлора окрашивается в оранжевый цвет; клетки эпителия и лейкоциты — в оранжевый или красно-бурый цвет. Результат считается положительным при обнаружении не менее 10 специфически окрашенных объектов.
Результат считается отрицательным, если при наличии не менее 50 клеточных элементов без специфического свечения отсутствуют «ключевые клетки».

Срок годности набора 1 год с даты изготовления.